m6A RNA甲基化从富集纯化到二代测序

炎炎夏日，当大家都捧着西瓜，在电视前收看六边形战士龙马在东京奥运会拼搏的身影时，作为科研工作者，却只能一如既往的在科研岗位上辛苦耕耘。

如何提高实验效率，再不耽误发文章的情况下，挤出一点点时间看看比赛呢，估计是很多人共同的心声！

工欲善其事必先利其器。一款好的产品能帮助客户极大程度提高实验效率，减少工作量的同时还能降低实验操作带来的风险。比如有一位客户想从RNA开始，完成最终目标——分子生物学分析。他的设计思路如图：

乍一看，貌似实验还是挺复杂的。但是不怕，因为小艾有一款出奇制胜的法宝，它就是m6A RNA富集纯化与二代测序试剂盒EpiNext CUT&RUN RNA m6A-Seq Kit m6A ，货号P-9016。

它能帮你从RNA样品开始，在不到6小时的时间内，完成m6A RNA富集纯化——文库建立——二代测序的所有过程，手动操作时间还不到1小时，真可谓一招搞定！

我们知道，m6A（N6-methyladenosine，6-甲基腺嘌呤）是真核生物mRNA内部序列中最常见的一种甲基化修饰，占所有RNA甲基化修饰的80％以上，并且存在于各种物种中。

m6A主要分布在mRNA上，在非编码 RNA(ncRNA)如tRNA、rRNA和snRNA上也普遍存在。m6A 修饰由甲基转移酶复合物 METTL3 催化，并被 m6A RNA 去甲基化酶 FTO 和 ALKBH5 去除，它们以 α-酮戊二酸 (α-KG) 和 Fe2+ 依赖性方式催化 m6A 去甲基化。

已知 METTL3、FTO 和 ALKBH5 在许多生物过程中发挥重要作用，从生长代谢到生育。

作为一种动态可逆的修饰方式，m6A RNA可以功能性的调节真核生物的转录组从而影响mRNA的剪接、出核、定位、翻译和稳定。

m6A RNA出现在多种重要的细胞生命过程中，意味着mRNA甲基化参与了多种生物学过程，如干细胞分化、生物节律等，同时也参与了多种疾病的发生，包括肿瘤、肥胖和不育等。因此精准地检测m6A，对了解其与人类发育和常见疾病的广泛联系有着重要意义。

为准确鉴定m6A，目前已经开发了多种检测方法，包括MeRIP-seq，PA-m6A-seq， miCLIP和m6A-CLIP。

其中，MeRIP-seq已被广泛用于m6A分析，但其精确度较低，且需要较大的样本起始量（>300 ug），限制了组织或细胞RNA得率少时对m6A的研究。

虽然PA-m6A-seq， miCLIP和m6A-CLIP在分辨率方面进行了改进，但是重复性差且过程复杂，不仅费时（＞2天）且成本高。

而艾美捷这款EpiNext CUT&RUN RNA m6A-Seq Kit m6A,通过CUT&RUN技术原理实现对m6A RNA的富集纯化以及二代测序。

CUT&RUN 通过使用靶标特异性一抗（m6A 抗体）和核酸酶分离与富集特异性目的片段。连接的第一链cDNA合成并用适配器标记，再进行文库扩增和加标签，并用二代测序分析。