我几个月前配了一个试剂,我配的应该是10mM的浓度,然后我标了10nM,过了2个月,当我用这个试剂得时候,我完全忘记了,按照标的浓度用,做了一周的实验,我足足多加了10万倍,细胞竟然没死,他们好强大。我还纳闷细胞怎么变圆了。今天让师兄帮我做,他灵魂拷问我,你为什么配这么低的浓度,怎么用的。我一查,才发现我配的是10mM,如果我配10nM,我得配了一升。
事实证明,我脑子非常不在线。
配试剂常用2种溶剂,水,和DMSO,配在水里,怎么用都无所谓。但是DMSO是有毒性的,一般1ml培养基,超过5ulDMSO,会影响细胞,我养的的细胞1ml培养基,加30ulDMSO,细胞出现毒性,形态变圆,别问我怎么知道的,血的教训。
大部分试剂都是可以配在DMSO的,因为它是万能溶剂。我们冻存细胞也用DMSO,90%血清+10%DMSO,低温下DMSO毒性较小,有很高渗透性,减少细胞内冰晶形成。冻存细胞的“慢冻快融”,让细胞内水分逐渐渗出,使用冻存盒,冻存盒里一般是异丙醇,熔点低。快融,细胞拿出来就放到37度水浴锅,融化后,培养基稀释离心,去掉高浓度DMSO。
跟我状态一样呀?
?感同身受,有时候做实验一个小迷糊就导致后患无穷