瓜瓜师姐今天给大家分享|凋亡细胞的流式细胞法检测实验技术教程，希望能够对大家有帮助~
为了方便大家阅读，先奉上目录思维导图：
01 原理与应用
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经染色后每一细胞结合的DNA特异染料（PI）与其DNA含量成正比，而细胞受激发后发射的荧光强度与结合PI的量成正比。
利用此特点流式细胞仪可将处于不同细胞周期的细胞分开。
- 凋亡细胞的染色质凝聚，DNA被裂解，在制备样品过程中，低分子的DNA片段扩散，加之凝聚的染色质排斥染色，致使凋亡细胞的可染性降低，在直方图的G0/G1期峰前出现亚二倍体区。
02 仪器与设备
- 材料：HeLa细胞，微量移液器吸头，400目的筛网、10ml 离心管。
- 试剂：凋亡诱导剂（根据情况自定）、0.02%EDTA、PBS（pH 7.2）、PI染液、100%乙醇（冰箱保存）、RNase（10mg/ml）。
- 设备：微量移液器、流式细胞仪。
03 试剂配制
- PI染液：100mg/L 的PI，1.0%的Triton X-100，0.9g/L的NaCl。4″C保存。
04 实验步骤
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- 收集细胞。
- 洗涤：冷PBS洗2次后制成2X106个/ml细胞悬液。
- 固定：加入冷100%乙醇（乙醇：细胞悬液=7↓3），4C固定12h以上。
- 洗涤：冷PBS洗2次。
- 加RNase A（：用500μl PBS重新悬浮细胞，加入RNase A（终浓度为0.1mg/ml）。
- 过滤：400目尼龙网过滤。
- 加PI：加PI 800μl，4C保持30min。
- 流式：流式细胞仪分析。
05 注意事项
- PI：吸入、摄入或经皮肤吸收均有害。
- 戴手套，穿白大衣在化学通风橱内进行相应的操作。
06 实验结果与分析
- 细胞碎片：检验样品前，通过调整流式细胞仪的域值排除细胞碎片。细胞碎片前散射光（FSC）、侧散射光（SSC）和FL2都很低，凋亡细胞的SSC高，FL2中等。
- 凋亡细胞：凋亡细胞在直方图的亚二倍体区。在FSC对SSC的散点图上，与正常细胞相比，凋亡细胞的前散射光降低，侧散射光可高可低依细胞类型而定。此外，凋亡细胞在直方图的Go/GI期峰前出现亚二倍体区。
