瓜瓜师姐今天继续给大家分享实验技术，今天给大家分享凋亡细胞的普通光镜观察——苏木精-伊红（HE）染色教程，希望能够对大家有帮助~
为了方便大家阅读，先奉上目录思维导图：
01 原理与应用
- 苏木精：苏木精易溶于乙醇、甘油及热水中，本身与组织亲和力小，不能成为染液，只有加入复盐和氧化剂方能成为染液，此时苏木精被氧化为苏木红，且与铝离子结合形成一种蓝色、带正电荷的碱性染料，可与细胞核中的脱氧核糖核酸根（带负电荷）结合完成染色。
- 伊红：伊红Y是一种红色酸性染料，为细胞质染色剂，一般配成0.5%~1%的乙醇溶液。
- HE染色：在苏木精染色后，经伊红复染，95%乙醇分色。苏木精-伊红染色简称HE染色。
- 细胞凋亡：细胞发生凋亡时，其形态产生一系列变化，如核染色质固缩、边集，染色较深，或核破裂甚至出现凋亡小体等，经HE染色，在普通光镜下即可观察到相应的变化。
02 仪器与设备
- 材料：Hela细胞（或别的细胞），染色缸、载玻片（预先经多聚赖氨酸或其他贴片剂处理）、盖玻片、计数板、10ml吸管、吸管橡皮球、15ml离心管、微量移液器吸头。
- 试剂：凋亡诱导剂（根据情况自定）、固定液（4%甲醛，或多聚甲醛）、磷酸缓冲液（PBS）、消化液（0.02%EDTA）、苏木精染液、1%伊红Y的乙醇溶液、梯度乙醇、二甲苯、分化液（75%乙醇-0.5%盐酸）、中性树脂。
- 设备：细胞涂片离心机、超净台、37℃ CO2孵箱、相差倒置显微镜、普通显微镜、100ul微量移液器。
03 试剂配制
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苏木精染液：苏木精1g，蒸馏水100ml，碘酸钠0.2g，钾矾50g，加温溶解后加入水化氯醛50g，枸橼酸1g，搅拌溶解后可长期保存。
04 细胞涂片HE染色实验步骤
- 制备细胞涂片：培养细胞，诱导凋亡，然后消化细胞，制成单细胞悬液。将单细胞悬液移至离心管，离心（1000g）5min，弃上清液并用PBS洗细胞1~2次后，制备细胞悬液，并调整细胞数至（1~5）×104个/ml，取100ul细胞悬液，用细胞涂片离心机（1000g，1~2min）制成细胞涂片。4%甲醛（或多聚甲醛）固定10min后染色。
- 染色：苏木精染液染色3min，自来水洗1min。
- 分化：在分化液中分化30s（提插数次）后用蒸馏水浸泡5~15min。
- 染色：伊红染液染色2min。
- 脱水：脱水、透明75%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、100%乙醇（I）、100%乙醇（Ⅱ）、二甲苯（I）和二甲苯（Ⅱ）各1min以脱水透明。
- 封片：中性树脂封片。
- 观察：普通显微镜观察。
05 注意事项
- 甲醛、二甲苯均有毒，而且甲醛有致癌作用，所以相关操作应戴手套等、在通风橱进行。
- 制备细胞涂片过程中，应将在消化前已脱壁的细胞收集在内。
06 实验结果与分析
- 细胞核蓝色，细胞质红色。凋亡细胞的核染色质固缩、边集，染色较深，或核破裂。
