好久不见，甚是想念。实验太忙，更新较慢。还请见谅，继续努力。
课题组背景
▪ 脑胶质瘤目前尚无有效的治疗手段，主流的方法是先通过手术切除肿瘤后进行化疗或者放疗，然后由于该类肿瘤细胞浸润程度高，复发率高，术后的生存期较短，属于一种无法根治的疾病。
▪ siRNA被认为是一种有效的肿瘤治疗新方法，然而基于该类疗法的脑胶质瘤治疗却受到很多因素的限制。包括稳定性差，血液循环短，血脑屏障渗透率低，低效率的肿瘤蓄积以及siRNA细胞内释放。
▪ 基于以上问题，本文作者为单个siRNA穿上了一层聚合物外衣，链接靶向多肽后实现了脑胶质瘤的siRNA高效靶向递送治疗。
文章主要内容
Figure 1. 课题设计思路
▪ 该纳米胶囊的制备使用了自由基聚合法。
▪ 由于siRNA带负电，作者制备了一个含有丙烯酸酯键的胍基化试剂，将其预先与siRNA吸附在一起，从而保证了自由基聚合能在siRNA表面发生。
▪ 接着在体系中引入了GSH敏感的二硫键和PEG-NHS的丙烯酸酯结构，然后加入APS和TEMED引发自由基聚合。
▪ 在siRNA表面包裹一层聚合物后，加入含氨基的Angiopep-2多肽进行酰胺化反应，进而连接到纳米胶囊的表面。
▪ 该纳米胶囊能够通过脑血管内皮细胞和肿瘤细胞表面高表达的LRP-1受体内吞进入肿瘤细胞。在细胞内高浓度的GSH作用下，siRNA在胞浆内快速释放，进而达到治疗肿瘤的目的。
Figure 2. 纳米胶囊的表征及敏感性考察
▪ 图A 粒径分布图。通过DLS测得该纳米胶囊粒径约为25.3 nm，PDI 0.21，与游离的siRNA的5 nm粒径对比可以说明，siRNA表面已聚合上一层polymer。
▪ 图B 纳米胶囊TEM成像。呈现均匀分布的球形，与DLS测得的粒径相符。
▪ 图C siRNA血清稳定性考察。考察裸siRNA和纳米胶囊在有无FBS的情况下siRNA的稳定性，可见裸siRNA与血清孵育1h后便大量降解，而纳米胶囊则较为稳定。
▪ 图D siRNA释放动力学。在GSH的环境下，siRNA能够快速实现80%的siRNA释放，而对照组则仅有20%的释放。
Figure 3. 纳米胶囊的BBB和体内穿透及基因沉默效果考察
▪ 图A siRNA血脑屏障跨越效率测定。体外BBB模型中，检测不同组别Cy5标记的siRNA跨越BBB后的比例，可见靶向多肽的修饰在不同时间段可以大大提高siRNA的跨BBB效率。
▪ 图B 细胞摄取定量分析。孵育24h后，流式细胞仪检测BBB模型下层肿瘤细胞对Cy5标记的siRNA摄取。定量结果显示，靶向多肽修饰的纳米胶囊能够显著提高siRNA的跨BBB效率。
▪ 图C 细胞摄取机制。激光共聚焦考察下层肿瘤细胞摄取siRNA后与溶酶体共定位情况，靶向多肽修饰的纳米胶囊能够穿过BBB被更多的摄取，并且能够实现溶酶体逃逸。
▪ 图D 细胞活力检测。MTT结果显示，在不同给药的浓度下，U87细胞对制剂未显现出明显的毒性，可见该纳米胶囊具有良好的生物相容性。
▪ 图E、F 基因沉默效率考察。使用荧光素酶和PLK1的siRNA作为模型siRNA进行给药，靶头组荧光素酶和PLK1的基因沉默效果较好。
▪ 图G PLK1蛋白表达水平考察。WB分析PLK1蛋白表达水平与上述基因沉默效果相符。
▪ 图H 促凋亡效果考察。靶头组能够促进较多的肿瘤细胞发生凋亡，这与其较高的摄取正相关。
▪ 图I 体内纳米胶囊肿瘤部位靶向穿透考察。（核：DAPI，绿色：CD31血管，红：Cy5标记的siRNA）荧光成像结果显示，靶头制剂组肿瘤部位蓄积更多，穿透更深。
Figure 4. 纳米胶囊的体内靶向及分布考察
▪ 图A siRNA体内动力学。通过不同时间点荧光检测血液中Cy5标记siRNA的浓度，制剂组能够显著提升siRNA体内的稳定性。
▪ 图B siRNA体内分布。通过活体成像展现siRNA在给药后24h内的体内分布情况，靶头组在脑部有着更高及更久的蓄积。
▪ 图C、D 给药后脑部肿瘤Luci信号表达情况。可见靶头组肿瘤信号在72h时显著降低。
▪ 图E 离体器官肿瘤及Cy5信号表达情况。靶头组能够显著减少肿瘤信号并提高脑内siRNA的蓄积。
▪ 图F 组织分布定量考察。通过测定组织匀浆中siRNA的荧光强度来确定各组织部位的siRNA分布量。
Figure 5. 纳米胶囊的体内药效考察
▪ 图A、B 模型小鼠肿瘤信号监测。给药20天左右，活体成像可见制剂组肿瘤的Luci信号显著降低。
▪ 图C、D 荷瘤小鼠的体重及生存变化。制剂组能够提高肿瘤小鼠的中位生存期。
▪ 图E 肿瘤部位TUNEL和Ki67染色。制剂组能够显著促进肿瘤的凋亡并抑制其增殖。
总结：这篇文章做的脑胶质瘤治疗相关实验可谓是中规中矩，没有太多华丽的数据，但亮点就在于制剂的设计。近两年自由基聚合都是大文章，而且很有设计感。但合成可控性不是很好，较为困难，之前尝试过结果也不是很好。
