一、实验目的：
通过检测目的细胞在Transwell小室中向含血清培养基的迁移情况来验证目的基因对细胞转移能力的影响。
二、实验原理:
细胞迁移是肿瘤转移的一个重要指标，Transwell小室可研究肿瘤细胞的迁移能力。小室底层有一张通透性聚碳酸酯膜，上室为无血清培养基，下室为含10%胎牛血清培养基，细胞对血清中的细胞因子等具有趋向性，利用这种趋向性促使细胞向含血清的下室转移，不同细胞会显示不同的运动转移能力。
三、实验材料：
胎牛血清、基础培养基、Transwell试剂盒、4%多聚甲醛、结晶紫染液（0.5%）、24孔板
四、实验流程：
细胞培养→转移小室准备→接种细胞至小室→细胞转移→转移细胞染色→显微拍照计数
五、实验步骤：
- 消化细胞，制备无血清细胞悬浮液，计数，加入细胞悬液100ul，接种细胞105/孔。
- 24孔板（下室）加入600ul含10%胎牛血清培养基，将小室置于24孔板中，上室加100ul无血清培养基悬浮的细胞。
- 37℃培养一段时间（24h、36h、48h，若48小时后仅转移零星细胞，不建议做转移实验。）
- 倒扣小室于吸水纸上，弃去小室内部培养基，用PBS冲洗小室
- 小室置于4%多聚甲醛（（24孔板，1ml））中，固定15-20min，PBS冲洗小室
- 小室置于结晶紫染液（24孔板，1ml）中，染色15min，PBS冲洗小室
- 用棉拭子轻轻擦去小室内部非转移细胞，空气晾干
- 显微镜下拍照：每个小室，随机选取视野，拍100X照片4张，拍200X照片9张。
- 以200X照片计数，进行数据分析，比较实验组、对照组转移能力差异：计算各组转移细胞数、标准差、T-Test分析得到的p值，判断是否有统计学差异。
