一、实验原理
MTT是一种检测细胞存活和生长的方法。实验原理为：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。DMSO能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值)，来判断活细胞数量。OD值越大，细胞活性越强(如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小)。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
(注：MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。)
二、MTT配制方法通常MTT配成的终浓度为5mg/ml，须用PBS做溶剂。（市面上一般MTT的包装为100mg,250mg或1g，对于100mg的包装，一次性将其全配制成溶液，如100mg用20m1PBS来溶解。）
具体做法：预先在50ml离心管加入20m1 PBS，从中先吸取500-1000u1 PBS装入含MTT的小管中，吹打数十次后将其移入50ml离心管，然后再混匀。可以重复几次以使小管中的MTT不残留于管内。将MTT完全混匀后，用0.22um滤膜过滤以除去溶液里的细菌，分装锡箔纸避光可长期保存于-20℃。
三、实验步骤（贴壁细胞）
1. 按实验要求处理实验组及对照组细胞（knock down/over express）
2. 接种细胞：消化对数期细胞，用含10％FBS的培养液重悬细胞，铺96孔板使待测细胞密度至1000cell/孔（根据细胞生长快慢决定铺板密度），每孔总体积（细胞悬液＋培养基）200ul（边缘孔用无菌PBS填充，且同样加MTT、DMSO处理）。
3. 铺好后，摇匀细胞，镜下观察细胞密度，培养箱培养。按照一定的时间梯度（1，2,3,4天…）处理细胞。
4. 每孔（含边缘孔）加入20ul MTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。（若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。）
5. 终止培养，小心吸去孔内上清液，不要吸掉孔板底部的甲瓒颗粒，
6. 每孔加入100ul DMSO，置摇床上低速震荡3-5min，使结晶物充分溶解。
7. 比色：在酶标仪490nm处测量各孔的OD值，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。（转运时用泡沫盒，避光）
四、注意事项：
1. 在配制和保存的过程中，要求避光。（实验时可关闭超净台的日光灯来避光，96孔板加时可不避光，毕竟时间较短），配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感。
2. MTT干粉存于2-8℃避光，一般最好现用现配，过滤后4度避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当MTT变为灰绿色时不能再用。
3. MTT有致癌性，用时戴薄膜手套.
4. 在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光度最好在0-0.7 范围内。
5. 如果药物本身有颜色，那么采用MTT法可以通过离心去除颜色的干扰，多次的离心和吸取上清要求操作者要小心和仔细，否则会降低试验的准确率。
