第一天
1. 二甲苯I: 10min(注意带薄膜手套，橡胶手套可溶于二甲苯）
2. 二甲苯II: 5min
3. 无水乙醇I: 5min
4. 无水乙醇II: 5min
5. 95%乙醇: 1min
6. 90%乙醇: 1min
7. 70%乙醇: 1min
8. TBS:2x5min
9. 抗原修复:30min（切片放入装有柠檬酸钠的小容器中，后放入蒸锅）
10.冷却至室温(20min)后,蒸馏水：5min
11.3%过氧化氢（新配）：10min→30min
12.PBS：3x5min，
13.含1%TritonX-100的TBS（不易溶，稍提前配制）:15min(轻轻搅动)
14.免疫组化笔围绕标本画圈（避免液体量过多）
15.5%BSA封闭液3滴：37℃，30min，甩干，勿洗
16.按说明书用TBS稀释的一抗（兔/鼠抗人）孵育：37℃，1-2h/4℃过夜（湿盒）
第二天
1. 恢复室温，蒸馏水：3min
2. TBS:3x5min
3. 二抗（羊抗兔/鼠）孵育：37℃，30min(延长至1h)
4. TBS:3x5min
5. 滴加SABC: 37℃，30min（提前30min准备）
6. TBS:3x5min
7. DAB显色：1-10min（一旦出现颜色—黄棕色，立即停止显色）
8. 自来水冲洗：2min
9. 苏木精：40s,自来水冲洗，避免染色过深
10.0.5%-1%氨水返蓝：30-60s，显微镜下观察
11.蒸馏水：3x3s
12.75%乙醇: 30s
13.95%乙醇: 30s
14.无水乙醇II：30s
15.无水乙醇I：60s
16.二甲苯I：1min
17.二甲苯II：1min
18.封片，晾干
注意：
1、IHC中，脱蜡前，将切片放在60℃的恒温干燥箱中烘烤4-12小时,或70℃1小时可防止脱片；
2、在实际工作中可以采用蜡封固切片和-20度低温保存组织切片来避免抗原损失，或石蜡组织块4度保存，用时再切片使用，这就可以大大降低抗原丢失率。
3、2X TBS（4℃无限期储存）配方
Tris 2.42g
NaCl 3.51g
加水至200ml（调PH至10.5）
4、自来水冲洗时，自来水冲手后，流至玻片。
