定量PCR的数学原理

PCR动力学曲线和四个阶段

• 右图反映的是随着PCR反应的进行相应的荧光信号的变化，比较直观，但是指数期很短。

• 左图反映的是荧光信号变化量的对数与PCR反应循环数的关系。

指数增长期内扩增曲线具有高度重复性：

定量PCR扩增曲线的各种概念：

1. 什么是基线？

•   基线：在PCR扩增反应的最初的几个循环中，荧光信号变化不大，变化趋势接近于一条直线，即扩增曲线的水平部分，这样的直线就是基线

2. 什么是阈值？

3. 什么是Ct值？

•   相同的模板进行96次扩增，终点产物不恒定；Ct值则极具重现性

    分析定量时候一般取Ct:15-35。太大或者太小都会导致定量的不准确

4. 如何使用Ct值计算结果?

绝对定量：检测起始模板数的精确拷贝数，通常需要用到标准曲线

相对定量：在一个样本中，目的基因相对于对照基因的量的变化

Ct值定量的数学原理：