转录组测序是研究特定的生物学样本，包括个体、组织、特定部位、细胞在特定时间所表达的全部转录本。近十几年来，随着基因测序技术的快速发展，转录组测序也得到快速发展，也越来越成为分子生物学课题和实验中非常常规的一种实验手段。
自从有了转录组测序技术，我们就在一直讨论到底需要多少个生物学重复才能满足要求？一般认为，至少要有3个生物学重复，但这仅仅是从数据分析的角度，回归实验本身，3个生物学重复，真的够吗？
有一篇文献，专门讨论了关于转录组生物学重复的问题，作者来自英国邓迪大学，发表在RNA杂志。
先说结论：
1）在任何条件下，都应该保证有至少6个生物学重复；
2）如果要关注差异表达基因，尤其是差异表达倍数不大的基因，建议至少12个生物学重复。
下面，我们看一下分析结果。
1）生物学重复数量与真实差异基因的关系
随着生物学重复的增加，鉴定出真实差异基因的比例由19%增加到74%
2）不同阈值下平均真阳性率与生物学重复数之间的关系
随着生物学重复的增加，平均真阳性率增加
3）生物学重复数量与真/假阳性/阴性基因数量的关系
随着生物学重复的增加，真阳性明显升高，假阴性明显降低
4）生物学重复与差异基因倍数的关系
可以看出，T设置较大（差异倍数要求较高）时，生物学重复的影响较小；当T设置较小（差异倍数要求较低）时，生物学重复的影响就很大了。也就是说，对于差异倍数不大的差异基因，在生物学重复较多时，才更可信。
以上是对本文几个重要结果的描述。
另外，对于不同来源的生物学样本，生物学重复的需求量也不同，比如对于临床样本，个体差异可能会比较大，建议尽量提高生物学重复的数量，以提升真阳性差异基因；比如对于培养的细胞样本，由于重复之间比较稳定，设置适当的重复即可。
