我们在进行动物科学和医学相关的基础研究中，血浆是非常常见的生物学样本，为保证结果的可靠性，要尽量减少甚至避免样本的反复冻融。关于样本反复冻融对实验结果的影响，我们已在之前讨论了两期，本期，我们继续通过一篇文献，讨论反复冻融对血浆的影响。
今年3月，Ke Hu等在Journal of Veterinary Internal Medicine杂志发表题为The effect of freeze-thaw cycles on determination of immunoreactive plasma adrenocorticotrophic hormone concentrations in horses的文章，讨论反复冻融对马血浆促肾上腺皮质激素免疫反应性测定的影响。
研究背景：血浆促肾上腺激素（ACTH）浓度测定（内源性或促甲状腺素释放激素刺激试验）是马垂体中间部功能障碍（PPID）最常用的诊断试验。由于促肾上腺皮质激素不稳定，样本通常被冷冻，以便运往实验室或对研究样本进行批量分析。然而，反复冻融对马ACTH的影响尚不清楚。
研究目标：探讨探讨反复冻融对免疫反应性ACTH浓度的影响。
研究方法：将马分为4组：第1组，垂体中间部功能障碍（PPID）阴性，无（促甲状腺素释放激素）TRH刺激；第2组，PPID阴性，有TRH刺激；第3组，PPID阳性，无TRH刺激；第4组，PPID阳性，有TRH刺激。在基线时或刺激TRH后30分钟采集每匹马的全血。用化学发光法测定血浆ACTH浓度。然后血浆样本在−80℃下冷冻>24小时，在4℃下解冻，5次冻融循环。用线性混合效应模型分析血浆ACTH浓度的变化。
研究结果：反复冻融（P=0.001）和PPID（P=0.04）对血浆ACTH浓度有显著影响，而TRH刺激对血浆ACTH浓度无显著影响。
图 第1组（使用内源性ACTH的无PPID，n=7，A）、第2组（TRH刺激后未使用ACTH的PPID，n=7，B）、第3组（使用内源性ACTH的PPID，n=7，C）、第4组（TRH刺激后使用ACTH的PPID，n=7）的免疫反应性ACTH浓度（基线百分比）的变化，D）。单个马的数据用虚线表示，组平均值用实线表示
图 对照组（n=14，黑柱）和PPID（n=14，灰柱）组在5个冻融循环中免疫反应性ACTH浓度（基线百分比）的平均值和标准差
结论：反复冻融可改变血浆ACTH浓度，且在患有PPID的马身上更快地观察到这种影响。为诊断PPID，在测定血浆ACTH浓度时应避免反复冻融。
本文讨论了反复冻融对马血浆中ACTH浓度的影响，证实反复冻融会对检测结果造成影响。对于其他血液类样本，检测其他指标时，可能也会受反复冻融的影响。为尽量获取更为真实的结果，建议不要反复冻融样本。
反复冻融对马血浆中ACTH浓度的影响，证实反复冻融会对检测结果造成影响