上期i实验，小编为大家介绍了实验室常用的转化（transformation）方法：热激法（heat shock）。本期的『i实验』小编将继续向大家介绍另一种高效的转化方法——电穿孔法（electroporation）的原理和实验操作流程。
电穿孔最初用于将DNA引入真核细胞，后来被广泛用于细菌转化。电穿孔法是将DNA转移到多种革兰氏阴性细菌（例如大肠杆菌）中的有效方法，有报道表明利用该种方法每μg DNA可实现109个电转化体。
电穿孔是一种物理转化方法，它使用电脉冲在细胞膜上形成临时孔，核酸等物质可以通过这些孔进入细胞。 这是一种将外源核酸引入许多细胞类型（包括细菌和哺乳动物细胞）的高效方法。
在宿主细胞和待转入的分子悬浮在导电溶液中，溶液中围绕混合物形成闭合电路。 此时，向溶液中释放仅持续几微秒至毫秒的电脉冲，这些脉冲会扰乱膜的磷脂双层结构并导致其形成临时的孔，同时，穿过细胞膜的电势升高，从而使带电分子（如DNA）以类似于电泳的方式穿过孔，进入细胞内部。
制备电穿孔细菌比制备使用热激法时所用的感受态细胞要简单，效率也高于热激法。大致的流程是将生长至对数中期的细胞用冰冷的灭菌去离子水（也有实验方案用甘油）清洗，降低溶液的离子强度后（为了防止电弧放电），加入10%甘油，-70℃冻存即可。
▼ 制备电穿孔细胞
挑取单克隆培养过夜
次日，将培养液接种后，振荡摇菌至OD600为0.4左右
将摇好的菌置于冰上孵育（15min-20min）
用灭菌水反复洗涤细胞后，离心，弃去上清后，用10%的预冷甘油重悬细胞，分装后置于-80℃保存。
▼电转
在冰上复苏感受态细胞
添加待转入的DNA后，继续再冰上孵育
将混合物加入电击杯中，注意这个过程不要出现气泡
设置好电压等参数，进行脉冲。听到指示音（蜂鸣声）后，向电击杯中加入LB培养基
将电转后的菌液培养40min(复原)
涂抗性平板，进行筛选，菌落计数计算转化效率（转化体数量/μg DNA）
多种因素会影响电转的效率：大肠杆菌的基因型、细菌的生长状态、制备温度，以及电脉冲的时间和强度等。
▼试剂与实验材料
由于电转会杀死部分细胞，所以一般需要的细菌量要高于热激法，相应的DNA浓度一般为1-10μg/mL
实验室一般会使用一次性的电击杯，使用之前可置于-20℃冰箱中预冷。
▼实验操作
电转前用双蒸水、75%乙醇清洗电转杯，再用无水乙醇冲洗并挥干，在冰上预冷
待转化的质粒等需要在转化前除盐纯化
电转前的实验操作应在冰上进行
电压设置对于转化效率至关重要，电压过低会降低转化效率，过高的电压会击穿细胞，造成细胞死亡。不同厂家的电穿孔仪的电转条件会有所差别，实验前要仔细阅读使用说明。
