“ 外泌体是细胞内多囊泡体与细胞膜融合后，释放到细胞外的一种微囊泡体，直径为30~100nm。作为一种新型的通信介质在细胞间进行高效的基因信息传递，外泌体几乎可以被所有的细胞分泌。”
外泌体研究近年来相当火爆，相信许多童鞋都正在以外泌体为课题进行实验吧。其实，外泌体的研究思路是相当套路的，主要就是外泌体分离、鉴定、功能验证等环节。如果你对外泌体感兴趣，来看看这篇文章吧，你想要的套路都在这里。
本期我们选择了一篇心血管领域的外泌体研究文章，该文章可以作为国自然等的预实验。通过该组研究，可以为后续更深入的研究提供证据，也是快速发表一篇外泌体文章的套路。该研究发表于Journal of Cellular and Molecular Medicine，IF=4.658。
结论一：外泌体参与成熟的DC细胞促进内皮细胞的炎症
Transwell是一种可以用于共培养的玻璃器皿，该滤膜能阻止比外泌体大的囊泡转移。
作者通过Transwell共培养DC细胞和内皮细胞，发现DCs细胞能促进内皮细胞的炎症反应，而GW4869能减弱该作用（Figure 1）。这表明外泌体参与成熟DC细胞在促内皮细胞炎症。
Figure 1
随后，作者使用了外泌体分离试剂盒进行外泌体分离。通过电镜分析，所获得的囊泡大小在109nm，符合典型的外泌体大小特征。通过检测一些外泌体相关marker，确定了分离的囊泡为外泌体。另外，作者检测了外泌体的阴性marker——钙连接蛋白来说明分离纯度。以上数据都表明作者成功从DC细胞中分离了外泌体。
Figure 2
作者接着通过实验证明LPS处理后的内皮细胞能很快提升p-p105水平；DC来源的外泌体也能较快提升p-p105水平（Figure 4C）。这表明DC来源的外泌体能通过NF-κB通路激活内皮细胞，且可能与外泌体膜蛋白及其受体相关。最后通过一个时间相关性实验，作者发现，LPS、DC外泌体都能很快上调p-p105水平，激活内皮细胞，而且分别在4h（小时）时达到峰值（Figure 4D-G）。
Figure 4
结论四：TNF-α的亚细胞定位与功能验证
作者研究发现TNF-α定位于胞膜，且相对于不成熟的DC来源的外泌体，成熟的DC来源的外泌体含有更多的TNF-α（Figure 5A,B）。
通过干扰成熟DC细胞的TNF-α，发现其激活的内皮细胞中粘附分子、p-p105表达量降低了；并且通过抑制TNF-α活性抗体孵育DC细胞，也能发现其激活的内皮细胞中粘附分子、p-p105的表达降低（Figure 5D,E）。这表明，DC外泌体膜高表达TNF-α能快速激活内皮细胞。
Figure 5
