细胞培养基中的浑浊是什么?

养娃要悉心照料,同样养细胞也需要无微不至的关怀,各种吃的穿的用的,更是一样都不能少,为了这些“可爱”的细胞们,不知道有多少生物医学科研人操碎了心。

这不,最近养的好好的细胞,这状态说差就差了,还不是细胞污染的原因,这究竟是什么情况?

细胞培养基中的浑浊,究竟是什么?

如果排除了污染,细胞培养基中的浑浊通常被解释为金属、蛋白和其他培养基组分的沉淀。沉淀物可能损害细胞健康,因为它们通过螯合可移除养分和其他需要的组分,从而改变培养基的组成。沉淀物也是显微镜可见的,可能会干扰依赖成像的实验分析。

产生沉淀的可能原因

1、温度变化

在细胞培养中,温度是引起沉淀的主要因素之一。当遭遇温度的极端变化时,高分子量血浆蛋白会从溶液中析出;热失活和冻融循环能促进蛋白降解和沉淀;因为液体或重组成培养基在使用之间保持冷藏储存,盐可能沉淀,尤其是10x或其他浓缩的储存液。

2、失水诱导的浓度改变

如果培养基可能蒸发,培养基组分(包括盐) 的浓度将会增加,特别是培养基表面可能容易形成晶体沉淀。

3、钙盐

制备无血清培养基时,组分添加的顺序可能导致不可溶分子的形成。钙盐尤其容易沉淀,比如CaCl2和MgSO4在溶液中反应产生CaSO4晶体。高压灭菌和pH值不稳定会加剧这一问题。

4、金属补充物

铜、铁和锌等金属离子是细胞生长所必需的,是无血清培养基的重要补充物。培养系统中其他血清组分的缺失可能导致这些金属沉淀,为细胞形成有毒的环境。在较高pH环境下(一般>8时),碳酸盐和氢氧根离子与铜离子、磷酸盐和氢氧根离子与铁离子、碳酸盐、磷酸盐和氢氧根离子与锌离子、氢氧根离子与镁离子易形成不溶性沉淀物;在氧化条件下,铜和锌更易于沉淀。

金属沉淀物及对应颜色:

硫化亚铜(I):黑色

氧化铜(I):黑色

氧化亚铁(I):黑色

硫化亚铁(II):黑色

氢氧化铜(II):蓝色

磷酸亚铁(II):蓝色

胱氨酸亚铜:蓝-灰色

碳酸铜(II):蓝-深绿色

氯氧化铜(II):蓝-绿色

醋酸铁(III):棕色

碳酸钙:无色

氢氧化锌:无色

磷化亚铜(I):灰-黑色

氧化镁:灰-绿色或棕-黑色

三氧化二铁(III):红-黑色

氢氧化铁(III):红-棕色

碳酸锰:玫瑰色

磷酸锌:灰色

磷酸钙:白色

磷酸镁:白色

氢氧化镁:白色

过氧化镁:白色

焦磷酸镁:白色

碳酸锌:白色

氧化锌:白色

硫化锌:白色

碳酸亚铜(I):黄色

氢氧化亚铜(I):黄色

过氧化锌:黄色

5、污染

培养物浑浊可能是细菌或真菌污染造成的。

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