MTT增殖实验心得

 小编的课题中需要检测细胞增殖,咨询了各位大神,大神们都推荐MTT实验,这种最经典也最常用的方法。于是小编我网上搜了一下Protocol,稍稍研读,发现挺简单的嘛,就开始动手做啦。可是看到结果小编傻眼了,复孔之间一致性好差,只能重做。无奈之下,小编只好请教曾执教多次培训班受到广大学员好评的平台资深实验员贾老师,几句点拨之下,就让我茅塞顿开。

下面小编就根据贾老师私家实验笔记为大家总结一下怎么能得到重复性较好的MTT结果。 

首先铺板前要保证细胞状态良好,细胞状态良好是实验的基础哦。

种板布局(关键步骤):

1. 保证初始铺板密度一致。需要对细胞进行计数,然后根据细胞计数结果,调整到铺板所需密度,在显微镜下观察各组细胞密度,保证实验各组之间铺板密度一致;

2. 对于铺板数量较多的实验,为了保证复孔均一性,细胞悬液混匀后尽量使用排枪加样,加样时注意观察每个枪道液面是否一致。

3. 防止“边缘效应”。由于边缘一圈的水分蒸发会很快,导致培养基及里面的药物会出现浓缩现象,最后导致这些孔于其他复孔之间的差异会非常大,所以需要在铺好细胞的四周一圈中加入若干的水或者PBS。

加MTT:

对于药物实验的MTT实验,加入MTT前需确认该药物是否具有氧化还原性。如果没有没有则可直接加入MTT溶液。如果没有把握或者药物本身具有较强的氧化还原性,则需用PBS清洗后再补加培养基,最后再加MTT溶液。加入MTT溶液时需要迅速准确,保证每组加入MTT的时间相差无几,特别是组数较多的实验。

加入MTT后的反应:

1. MTT反应结束后,需要完全弃去各孔中的液体,该过程需要小心仔细,避免将沉淀吸出,导致复孔差异较大。

2. 加入DMSO后,需要甲臜充分溶解后,才可上机检测。建议在96孔板振荡器震荡数分钟,同时肉眼观察无沉淀剩余后再上机检测。

基础实验

细胞增殖检测:MTT法

2020-3-8 16:57:43

基础实验

MTT法测细胞增殖和药物毒性实验protocol

2020-3-8 16:58:46

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