细胞如何养好、避免污染,污染了该如何抢救?

“师兄,这个细胞系是哪里来的呀?”,“师兄,细胞里飘动的黑点是什么?”,“啊,师兄我的细胞全挂了……”

 

实验室新来的师妹总是对养细胞充满疑惑,养得胆战心惊,结局不出师兄所料——细胞果然污染、死亡了。身为师兄,不免想要帮一把师妹,所以总结了新手在最开始经常遇到的几个问题,与大家分享。

1、细胞从哪里来?

1)细胞类型有哪些:

 

动物细胞系(来源于各种动物的细胞系,如常见小鼠来源的巨噬细胞系RAW264.7细胞)

 

 

人源细胞系(通过选择的永生细胞株,包括HeLa、OVCAR-3和LNCaP等常见癌症细胞系)

 

带标记基因的细胞系(报告标记细胞系用于监测各种生物学功能。(如GFP或荧光素酶))

 

基因突变细胞系(部分细胞有确定突变的细胞系,基于ATCC研究和Sanger Institute COSMIC数据库)

 

原代细胞(从机体取出后立即培养的细胞,培养较难)

 

正常细胞系(来自同一供体的肿瘤/正常匹配细胞系对,使研究人员可以将肿瘤细胞系的实验结果与正常细胞系进行比较)

 

基因编辑细胞系(使用基因编辑工具(例如CRISPR / Cas9)创建的等基因细胞系,常用于个体基因治疗的研究)

图片来自:

https://www.atcc.org/Products/Cells%20and%20Microorganisms/Cell%20Lines.aspx

 

2)细胞来源主要有:

同一个实验室可以传承师兄师姐的细胞系。

搜集标本,学习师兄师姐的成熟方法培养原代细胞。

或者通过各方面打听,向别的实验室“化缘”而来。

另立门户,满世界寻找新的细胞

 

寻找新细胞推荐:

ATCC

全称为American Type  Culture Collection美国菌种保藏中心,号称,目前它可以提供各种动植物细胞、标准品菌株达两万多种。可以在上面查询搜索细胞名称。

中科院细胞库

隶属于中科院生化细胞所,下属细胞库和干细胞库。有四百多种细胞可对外提供资源共享服务,是全国范围内细胞种类最全、供应量最大的资源中心之一。

文献检索

细胞名称、特点作为关键词可以检测到细胞来源、培养条件、检测方法等信息。

靠谱公司

询问实验室助研老师、老板、师兄师姐,找到靠谱的公司购买细胞,需要询问细胞的来源、STR检测结果

网络论坛

在某些生物医学论坛上,可以发帖询问同城实验室有无类似细胞。

 

2、细胞怎么养才不污染?

费劲心思找到了新细胞,当作宝贝一般养起来,怎么可以随便被污染?但是细胞培养过程中的确到处都是坑。

图片来源:https://www.atcc.org/en.aspx

 

培养前:

应确保培养环境无污染,细胞系STR检测合格,未发生分化、突变、污染等。

 

培养中:

严格遵守培养流程,做好无菌操作,(不要轻信师兄老油条的简化偷懒方法,会出事的)。

培养后:

如果细胞老化、污染或者死亡,应及时放弃,避免进一步污染。

如果贵重细胞,可以再抢救一下

3、细胞怎么才长得好?

不止要保证细胞不会死亡,还要保证细胞处于良好状态这样才能保证细胞的遗传物质、代谢情况、生理病理过程是符合实验条件的,进行实验处理以后,才能得到正确结果。

图片来源:http://bitebo.com/a/gb2312/news/20140312/5121.html

如检查药物A作用下B蛋白的改变,如果细胞状态不好,或外界条件使之处于应激状态,根本无法表达B蛋白,那之前花费数天的养细胞、收蛋白、跑WB,就白忙活了。

细胞来源控制:

一般从各个来源获得的细胞,换一个环境培养的时候都需要经过一个磨合期。

原代细胞培养尽量不要传太多代,不要轻易更换培养条件。

通常细胞系传代培养几代以后状态会变好。如果状态一直很差,可以通过观察细胞形态等确定细胞是否老化、污染、凋亡等。

环境:

孵箱中的去离子水要充足、洁净;二氧化碳浓度适合。

要定期清洁孵箱,出现污染的苗头要及时止损,放弃污染的细胞。

实验室同时进入的人不要太多,更换专用的

营养:

培养基的种类、血清的浓度配比非常重要,可以通过查询ATCC官网、高质量文献、询问师兄师姐经验、询问公司售后等方式了解细胞正常的形态、血清浓度等。

操作:

流程规范,在离心后及时把细胞吹散,重新悬浮,未悬浮的细胞不能较好贴壁。

吹打力度适中,次数适中,机械应力对细胞也是一种伤害。

把细胞从贴壁状态吹打下来时不要用力过大,一方面损失细胞,另一方面吹散培养基造成污染。

根据师兄总结的几点干货,师妹美滋滋的回去琢磨了,再在细胞房见到她,似乎少了一些愁容,多了一丝自信。

最后,希望大家也能在细胞培养之路上少点坑,多点成功!

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