文献解读:白血病危险的免疫相关因子

今天跟大家文献解读的是19年11月份发表在Clinical Cancer Research上的一篇文章,影响因子8.911
 
Characterization of Immune Dysfunction and Identification of Prognostic   Immunerelated Risk Factors in Acute Myeloid Leukemia
急性髓细胞性白血病的免疫功能异常特征及与免疫相关的危险因素的鉴定
 
.材料和方法
1.1研究设计和人体标本
该研究包括50名新诊断的急性髓性白血病(ND AML18-66岁)患者和24名健康对照(HCs20-62岁)。对24例化疗后完全缓解(CR)和20例难治复发(RR)患者的血样进行横断面研究。从15位患者中收集了成对的化疗前后的外周血(PB)样本。表1总结了研究中所有AML患者的基本特征。

 表1.AML参与者的基本特征
1.2外周血单核细胞的分离
从肝素处理的试管中采集新鲜的PB样本,用于血浆选择和外周血单核细胞(PBMCs)。血浆选择后,用磷酸盐缓冲盐水(PBS11稀释PB样本,然后通过Ficoll-Hypaque密度梯度离心分离PBMC。用添加10%胎牛血清的RPMI 1640冲洗细胞,然后立即用于多参数流式细胞术。
1.3多参数流式细胞仪分析
1.4细胞因子产生测定
在RPMI1640中洗涤PBMCs,加入10%FCS,用聚丙烯酸甲酯(PMA50ng/ml)和离子霉素(1μM)刺激淋巴细胞后,进行细胞因子产生测定。在37℃下5小时后,首先用荧光色素相关的表面分子特异性单克隆抗体对细胞进行染色;然后,用针对以下细胞内蛋白的单克隆抗体对细胞进行固定和渗透性染色:肿瘤坏死因子α(TNF-α),干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-2IL-2)、白细胞介素-17AIL-17A)和白细胞介素-4IL-4)。
1.5统计分析
使用Mann-Whitney U检验确定两组之间的统计差异,使用Kruskal-Wallis检验确定三组之间的统计差异。使用Wilcoxon配对的符号秩检验比较配对的样本。应用Spearman进行相关性分析。计算总生存(OS)时间和无事件生存(EFS)时间以进行生存分析,并使用中位数对患者进行分组。Kaplan-Meier对数秩检验用于比较组间生存差异。通过单变量分析选择P <0.05的变量作为协变量,以在多变量Cox比例风险回归模型中进行调整,以95%置信区间(95CI)估计风险比(HR)。EFS中的事件指对化疗无反应,疾病进展,复发和死亡。使用GraphPad Prism 7.0版和IBM SPSS Statistics 22.0分析所有统计数据。
 
.结果展示
2.1外周血淋巴细胞组成特征
首先,作者根据50ND-AML患者和24HC患者来概述PB的总体分布,结果显示诊断时的患者与HCs患者相比,总CD3+TNK和γδT细胞的比例降低,但NKTB细胞频率无明显差异(图1A)。在ND-AMLCD4 + T细胞中CD25 + CD127CD25 + Foxp3 + Treg亚群的百分比升高(图1B)。该分析结果表明,患者Th1细胞的频率降低,Th17细胞的频率升高(图1C)。接下来,作者使用CD45RACCR7区分T细胞的几种成熟和记忆状态,观察到患者中CD4 +CD8 + T naïve子集(TNaïve),CD8 + T中枢记忆子集(T CM)的百分比降低,并伴随着CD4 +CD8 + T效应子记忆子集(T EM)的百分比降低(图 1D)。

 1. TNK细胞的淋巴细胞组成和免疫表型特征
 
2.2 AML患者CD4+TCD8+T细胞表现出衰竭和衰老的特点
接下来,作者对CD4 + TCD8 + T细胞进行了免疫表型分析,以定义激活,衰老和抑制性分子表达的特征(图1E-F)。作者观察到CD28CD57+PD-1+在病变的CD8+T细胞中累积,但在CD4+T细胞中没有累积,这表明存在明显的晚分化、衰老和衰竭状态。
 
2.3 AML患者NK和γδT细胞活化受体表达下调
NK细胞是抗肿瘤免疫力的重要组成部分,AML患者在NK细胞中显示出反向的CD56/ CD56暗淡比率(P <0.0001),表明患者中的NK细胞显示出趋向成熟的趋势(图1G)。在患者的NK细胞中发现激活受体NKG2DNKP30的下调,但NKP46的表达不受影响。此外,两组的NKT细胞中的激活受体和抑制受体表达相似(图1H)。此外,作者观察到Vδ2+细胞中PD-1表达增加而NKG2D表达减少,表明在诊断时处于高度活化状态(图1I)。
 
2.4 AML患者的CD3+T细胞显示细胞因子产生的改变
在这组实验中,作者评估了在用PMA和离子霉素刺激后CD3+T细胞的细胞因子产生(图2A)。慢性病毒感染期间T细胞衰竭的另一个特征是无法以分层方式产生效应细胞因子,在衰竭的早期阶段丧失产生IL-2的能力,随后是TNF-α的丧失,最后是IFN-的丧失。AML患者的CD4 + TCD8 + T和γδT细胞显示出有缺陷的IFN-γ产生,但TNF-α和IL-2的产生没有明显减少。患者和HCsIL-4产生也相似。热图中总结的无监督聚类分析也证明了细胞因子产生的改变(图2B)。
接下来,作者研究了来自患者的总体CD28CD57 + PD-1 + T细胞中的细胞因子产生。在总的衰老的CD28CD57 + T细胞中,IFN-γ和TNF-α的表达强度较高,而两个亚群的其他细胞因子表达相似(图2C),由于病变的CD8+T细胞中积累了CD28CD57+PD-1+表型,作者探讨了PD-1表达水平是否与晚期衰老的CD28CD57+亚群中细胞因子的产生相关(图2D),并发现其与肿瘤坏死因子α和干扰素γ的表达呈负相关。

图2. CD4 + T,CD8 + T和γδT细胞中细胞因子产生的功能表征

 
2.5在具有不同治疗反应和复发的患者中,免疫特征存在差异
在诱导化疗前后,对15例患者(10例达到CR5例未能达到CR)进行免疫功能配对比较。通过治疗反应分析,与治疗前水平相比,仅CR患者的几种免疫功能发生了变化(图3A)。接下来,作者扩展了研究以分析CR组和RR组之间的免疫特征差异(图3B)。结果显示RR组的患者表现出过度的NK成熟和γδT免疫缺陷。 

3. 在具有不同治疗反应和复发的患者中,免疫特征存在差异
 
2.6免疫学特征与临床特征之间的关系
在这一部分,作者研究了免疫标记是否与临床特征相关。应用Spearman检验进行相关分析,接下来关注了三个有意义的临床参数:年龄,白细胞计数和细胞遗传学风险组(表2),这些参数在回归分析中可预测预后。

2. OSEFS的单变量和多变量Cox回归分析
 
结果显示,年龄与CD28CD57+PD-1+CCR7CD8+T细胞亚群频率呈正相关(图4A),表明老年患者CD8+T细胞终末分化和衰竭。高白细胞增多症通常表明AML患者的白血病负荷更高,这可能与CD3+T频率和Th1 / Th17比率呈负相关(图4B)。具有不良预后因素的患者表现出较高的CD28CD57 + CD8 + T细胞百分比(图4C)。

 图4.临床参数和免疫特征的相关性和生存分析
 
2.7对化疗反应、复发和生存的预测作用
传统细胞遗传学低风险、中风险和高风险组患者之间的生存差异(图4D)。治疗前PD-1+CD8+TCD28CD57+CD8+T亚群与较差的的OSEFS有关(图4E)。诱导化疗后第+30PD-1+CD8+T频率升高与诱导化疗后不良OSEFS相关(图4F)。
好啦,这篇文章的内容到这里就结束了,马上就假期了提前祝大家假期愉快哦~
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