作为WB实验关键，一支高质量抗体可能在一次成功实验中占据50%以上的地位。然而事与愿违，价格便宜的抗体往往有着这样那样的问题；同样，某些大家公认的抗体品牌虽然质量稳定，但动辄高昂价格注定这些抗体比金子更珍贵。其次，要获得稳定数据，频繁更换抗体肯定不行，况且A公司抗体向来以质量不稳定著称，接下来摆在我们面前的问题就是如何尽量节约抗体使用？如何尽量利用这有限的抗体做更多实验？
1. 前期实验摸索出来的条件是Bcl-2抗体需要1：200稀释，Cyclin D1抗体需要1：300-1：500稀释即可。要节省抗体，用传统培养皿内浸泡PVDF膜孵育方法至少要3ml以上液体，而这样体系中Bcl-2抗体需要10：1以上，Cyclin D1抗体需要约10：1。虽然抗体可以回收，但回收后的抗体保存时间有限，最多也能做几次实验。因此，我们先排除这样的反应体系。
2. 请教其他实验室老师后，他们是在杂交袋中孵育，使用抗体较少。经过尝试，这个方法做出来的结果不太稳定，经常出现条带模糊、显色较浅甚至同一条带显色深浅不均的情况，我们考虑这种结果的原因可能是因为杂交袋和PVDF膜表面相互摩擦，影响抗原抗体相互作用；另外，虽然杂交袋抗体用量较少，但是杂交袋内抗体稀释液不能均匀分布在PVDF膜的表面，可能是导致显色深浅不均的主要原因。因此，这种方法也被我们放弃了。
3. 在一次偶然机会中，我发现实验室常用的封口膜（parafilm）具有明显的疏水性，水滴滴在封口膜上不会散开，而是像荷叶上水珠一样浮在封口膜表面。这启示我们，用封口膜将抗体稀释液“托住”，把PVDF膜覆盖在上面孵育，PVDF膜和封口膜之间形成一个“三明治”样结构，通过表面张力抗体液悬在中间，这样不仅可以节省抗体，也能保证抗体的均匀分布（如图）。经过实践，我们发现这种方法是可行的。该方法简单、易操作，主要步骤包括：
（1）把封口膜贴在桌面或者小盒子中；
（2）根据PVDF膜大小，按一定比例制备抗体工作液500-1000ϰl，混匀后滴在封口膜上，注意尽量不要有气泡；
（3）把PVDF膜蛋白质结合面向下缓慢盖在液滴上，反复提起、放下几次，使液体均匀分布；
（4）用棉签轻轻压迫PVDF膜，赶走气泡。此步至关重要，一定要确保没有气泡，以免阻碍抗原抗体结合；
（5）用小纸盒或盒盖盖在整个体系之上，防止蒸发，常温孵育2小时或4摄氏度孵育过夜后常规洗膜和孵育二抗，然后显色；
（6）用后的抗体可用移液器回收，加入叠氮钠，置于EP管内4摄氏度或-20摄氏度备用。
用第三种方法，每次只需要数微升或更少抗体，且结果很满意，回收抗体再次使用甚至第3次使用仍然可获得叫好的结果。如此精打细算，我们是不是节省了许多比金子更为贵重的抗体呢？
1.针对实验问题，抱着实验室protocol不放虽然不违反原则，但也无法彻底解决根本问题。善于听取他人经验和勇于尝试自己的想法往往能找到捷径。
2.WB是一种成熟实验方法，但是整个实验过程中变数极多，结果常常让人困惑。通过仔细分析原因和不断探索，往往能找到症结所在。如果我们在使用杂交袋的过程中，得到的条带模糊甚至深浅不均，我们开始怀疑是否是蛋白样品本身的问题，用常规方法排除这种可能后，同学提出了一个看似低级的观点“抗体分布不匀”，而事实证明的确是这个问题导致实验结果的不稳定。这也告诉我们，当实验出现问题时，不要总把事情想得太复杂，有时候也许问题的本质就是那些看似不可能的小细节。
3.无论是实验还是生活，一些点滴的细节常常能给我们启示。如封口膜上的水珠，谁会把它与WB联系起来呢？也许是迫于困境，看到封口膜上滚动的水滴，灵光一现的联想成就了这个节省“黄金”的小点子。善于观察，多动大脑，貌似不经意的小操作可能成为解决困境的关键。
一双善于发现细节的眼睛可以成为你打开科研难题的金钥匙。
