Western blot

  • photoshop测量Western blot灰度值教程

    这节课想分享下Western blot灰度值测量的方法。今天主要讲述如何用photoshop测量WB灰度值,在讲述操作方法之余,小石头先给大家理一理原理,以便大家更好的理解(文末附操作方法)。 照例最先展示下最后的成果图(其实最后可以用Graphpad做图,在此不赘述):   好了,开始今天的课程,现在手里有张这样的WB条带图, 如何将各条带灰度值…

    2020年5月24日 0 574
  • Image J测Western blot条带灰度值教程

    关于用Image J量化Western blot条带灰度值,在网上一直盛传着两种操作方法,然鹅~小伙伴们却一直不确定到底哪种才是正确的测量灰度方法,甚至将灰度与光密度弄混淆。今天咱们一起就这个机会学习下,请先看看你是用以下那种方法测量灰度值?以下是两种方法的具体操作。 方法一 1、打开Image J软件→左上角file→Open 选择自己的条带图片(事先把条…

    2020年5月9日 0 414
  • Western blot实验技术及常见问题分析

    Western blot基本原理: 在电场的作用下将电泳分离的多肽从SDS-PAGE凝胶转移至一种固相支持体,然后用这种多肽的特异抗体来检测。 Western blot应用: 目的蛋白的表达特性分析; 目的蛋白与其他蛋白的互作; 目的蛋白的组织定位; 目的蛋白的表达量分析; Western blot一般流程: 蛋白样品的制备: 1 水溶液提取法:稀盐和缓冲系…

    2020年4月16日 0 413
  • 入门Western blot日常实验中容易忽略的小细节

    一、Western blot篇 网站上讲WB的文章有很多,在这里,我主要是想给大家讲一下电泳仪的维护:整套电泳仪里最贵的部位也是最重要的部位就是正负电极和连接整体的电极丝。但是电泳液对电极是有腐蚀性的,不知道大家有没有注意过一点,当你电泳槽中注满电泳液时,电泳结束后,正负电极头的周围会有蓝色的沉积出现(如下图) 这就是电泳液腐蚀电极的表现。虽然这种现象短时间…

    2020年3月29日 0 370
  • 怎样选择合适的Western blot封闭液?

    在做Western blot实验中,会用到固相载体(如NC膜,PVDF膜),在这些固相载体表面有很多洞洞,通过电转,胶上的蛋白被转移到膜上,蛋白以机械填补(堆积)和吸附的方式结合于表面。蛋白塞进了表面的很多洞洞里面,但是蛋白并不是连续的,而有很多空隙,抗体也是蛋白,也会被吸附在空的洞里,这样就会有很多非特异性的信号。 封闭液中的蛋白可以与固相载体表面的空白位…

    基础实验 2020年3月23日 0 192
  • 什么原因会导致了Western Blot出现膜空白?

    Western Blot既冗长又繁琐,而且很多人获得的结果都是空白膜或不清晰。出现这些问题到底是受到了什么影响呢?导致上述问题的因素有很多,如下: 1、胶和膜放反了:如果在转印的过程中,胶和膜的位置颠倒了,那么蛋白就从胶上转移到缓冲液中,而不会到达膜上。对于标准的转印,凝胶应靠近三明治的负极,而膜对应正极。 2、转膜效率低:转膜效率受多种因素影响,包括蛋白的…

    基础实验 2020年3月20日 0 229
  • 磷酸化蛋白做Western blot的小妙招

    磷酸化蛋白的Western blot检测是信号通路研究中的经典方法。然而,有时会出错,本文在此向各位介绍磷酸化蛋白做WB的一些小妙招。   ●    一定要在Lysis Buffer中加入蛋白酶抑制剂,还要加入一定量的磷酸酶抑制剂,否则即使band压出来也会很浅,结果也不可信。(磷酸酶抑制剂中,钒酸钠(Na3VO4)的使用浓度为1mM,氟化钠(Na…

    基础实验 2020年3月19日 0 245
  • Western blot实验的6点经验总结

    Western blot(蛋白印迹)作为科研研究中最为平常的实验,却蕴含了很多知识,可谓是小实验里却有大文章。尽管绝大多数研究僧在接触该实验时都会被虐的体无完肤,却也在和WB斗志斗勇的过程中积累了不少经验。正所谓前人种树,后人乘凉,现在中洪君就把前辈做WB实验的经验总结起来,希望对大家能有所帮助。 1、关于蛋白提取: 1. 裂解buffer:每种裂解buff…

    基础实验 2020年3月18日 0 293
  • Western blot常见失败问题原因总结

    做了很久的 WB(Western blot),走了很多弯路,其实发现 WB 想要做好并不难,总结了 WB 实验中可能会遇到的问题,分析了可能的原因及对应的解决方案,希望能成为你实验成功的基石。 问题 1:转膜不充分 (1) 膜没有完全均匀湿透 使用 100% methanol 浸透膜。 (2) 靶蛋白分子量小于 10 000 选择小孔径的膜,缩短转移时间。 …

    基础实验 2020年3月17日 0 399
  • WB、IHC实验问题总结与处理方案

    1、Western blot的优点 答: 灵敏,可达ng级,用Ecl显色法理论上可达pg 级。方便,特异性高。 2、为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白? 答: 原因有很多: a) 你的细胞中不表达这种蛋白质,换一种细胞; b) 你的细胞中的蛋白质被降解掉了,你必需加入PMSF,抑制蛋白酶活性; c) 你的抗体不能识别目标蛋白,多看看说明,看是否有问题。 3、…

    基础实验 2020年3月16日 0 392