PCR

  • qPCR实验操作、分析、数据处理完整教程

    Hi,又见面了大家,最近不得不说的就是由新型冠状病毒引起的全国性疫情。本着“口罩带好,论文接稿”的态度,本人老老实实待在家中,躺在床上一动不动。可是我那上进的师妹看到新型冠状病毒的检测方法qPCR,想到了一些奇怪的实验数据,微信上发来好多问题,刚好趁此机会,我们就一起学习这个经典不可或缺的实验qPCR。 最开始进入实验室时,就能听到一堆类似名词,RT-PCR…

    2020年3月12日 0 292
  • Universal ProbeLibrary在线引物设计PCR引物(物种齐全)

    1、ID查询 这里我们以“human p53”为例,进行引物设计。 点击进入PubMed 网站:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed 进入PubMed网页后,首先我们可以在搜索栏中选择核苷酸,再输入基因+物种+mRNA,最后点击搜索开始检索。 然后会出现上图所示的界面,这时候我们可以单击选择mRNA选项。如下图所示,此条目为…

    2019年12月27日 0 306
  • PCR常见问题以及解决方案总结

    实验室最磨练耐心的实验,PCR算是其中之一了。都说,PCR和WB做不好,毕业肯定毕不了! 对于熟读 protocol,与 PCR 进行过多次正面交锋的高阶实验汪,PCR 结果也会出现很多问题,如无扩增产物或扩增效率低、 出现非特异性扩增或 smear 带、扩增平坡等。   下面就带大家看看,师兄师姐们被虐经验总结。 问题 1:无扩增产物或扩增效率低 解决方法…

    基础实验 2019年12月24日 0 214
  • 确保PCR实验成功的几个重要因素

    PCR 是一个坑,坑里埋了好多研究僧……   PCR 是众位「研究僧」日常实验中最常用的技术,可谓是「研究盛宴」中的一道「小菜」。可也有不少童鞋反映,这道菜不好吃,一不小心就「小河里翻船」。   那么,我们该如何把这道菜「吃好」、跳出这个「坑」呢?   诸位看官莫急,待我送君「三大法宝」。     一、确保 RNA 样本合格 &…

    2019年11月3日 0 344
  • 实验室养细菌的那些事

    作为一个科研工作者,养菌是必备技能。但是菌儿子不比蛙儿子,不是给几个饼就能打发的,菌儿子需要360度全面呵护,享受国王级待遇,稍有不慎就game over了。因此对吾等科研工作者来说,宁可放女朋友的鸽子,绝不能错过菌儿子的生长发育,我们需要时刻陪伴他成长。 经历了重组、构建、验证,菌儿子终于顺利进入培养阶段,但是菌儿子长大之路异常坎坷啊!初期培养测量其生长曲…

    杂谈 2019年11月3日 0 248
  • 利用NCBI设计特异性PCR引物的方法

    一般来说,获取引物的方式有5种: 1),查询相关文献(建议参考IF≥5的文献); 2),引物合成公司在线设计(如: 金斯瑞,http://www.genscript.com.cn/DNA_Oligo.html?src=mostpopular; 生工,https://www.sangon.com/newPrimerDesign(需注册并登录)); 3),Pri…

    2019年11月3日 0 637
  • 常用的查询各种RNA的PCR引物序列数据库

    荧光定量PCR是我们检测RNA表达最常见的实验室四大技术之一,其中引物序列的设计是大家常常遇到的问题,今天我们来介绍几个常用的查询PCR引物序列的数据库。   1. Primerbank:https://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/ 这个使用起来比较简单,物种只有人和小鼠两个,可以直接根据基因名进行查询: 也可以根…

    2019年11月3日 0 414
  • 转染方法的选择以及转染技术的注意事项

    转染可谓是做生物学实验的大家经常会考虑的一项实验技术,大致原理也都是明白的。实验室的师妹也一直在进行这个实验,最近她却一直愁眉苦脸,问了才知道,原来她转染完的细胞,去跑qpcr验证的结果一直不行,转染效率太低以至于无法进行后续的实验。到底转染是什么呢,为什么转染效率不高呢,今天我们就来一起讨论一下其中奥妙吧。 转染,就是在真核细胞里导入具有生物功能的核酸,并…

    2019年10月31日 0 264
  • 基本概念RNA是什么?cDNA是什么?内参是什么? real time PCR 是什么?

    废话不多说,前路无铺垫,直接上干货。 1、基本概念RNA是什么?cDNA是什么?内参是什么? real time PCR 是什么?   RNA分为mRNA, tRNA, microRNA…使用trizol提取的是总RNA,并且总RNA中mRNA含量最多,其他的量很少,所以默认提出来的就是mRNA。cDNA是由mRNA反转录来的DNA,实验中需要用到cDNA,…

    2019年7月23日 0 542