细胞培养技术集锦

  • 细胞培养方法(十二):细胞计数

    细胞计数 在细胞培养工作中,常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活,确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度,如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别,冻存细胞复苏后的活力检测等。细胞悬液制备后,常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色,进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高,可使染料进入细胞内而使细胞…

    2020年3月23日 0 328
  • 细胞培养方法(十一):流式细胞术鉴定表面抗原

    流式细胞术鉴定表面抗原 1实验方法 1.用6孔板培养细胞,待细胞生长达到60%-70%,弃掉旧培养基。收集对应细胞培养基到一离心管内备用。 2.用0.25%胰酶消化细胞,至细胞变圆,加入前面收集的细胞培养基,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞,收集到离心管内(注意:悬浮细胞不需要胰酶消化,直接收集到离心管即可)。 3.200g离心5min,沉淀细胞。对于特…

    2020年3月23日 0 346
  • 细胞培养方法(十):流式细胞术检测细胞周期

    流式细胞术检测细胞周期 1实验方法 1.用6孔板培养细胞,待细胞生长达到60%-70%,根据实验需求处理,继续培养; 2.根据实验细胞处理后,把细胞吸出至1.5ml离心管内,200g 离心5min; 3.用 PBS 洗涤细胞2次,200g离心5min,收集1-5×105 细胞; 4.细胞固定:加入1ml冰浴预冷70%乙醇中,轻轻吹打混匀,4℃固定2h或更长时…

    2020年3月23日 0 300
  • 细胞培养方法(九):流式细胞术检测细胞凋亡

    流式细胞术检测细胞凋亡(FITC-PI) 1实验方法 1.用6孔板培养细胞,待细胞生长达到60%-70%,吸出旧培养基,根据实验需求处理,继续培养。 2.根据实验处理时间,把细胞培养液吸出至一合适离心管内,PBS洗涤贴壁细胞一次,加入适量胰酶细胞消化液消化细胞。室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶细胞消化液。需避免胰酶的过度消化。(注意:悬浮…

    2020年3月23日 0 407
  • 细胞培养方法(八):平板克隆实验

    平板克隆形成 1基本原理 克隆形成试验是测定细胞增殖能力的有效方法之一,贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。细胞克隆形成率表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量,可以反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。 2所需材料 · 细胞生长培养基 · 胎牛血清 · 胰蛋白酶 · PBS ·  青霉素-链霉素溶…

    基础实验 2020年3月23日 0 705
  • 细胞培养方法(七):Transwell 迁移/侵袭实验

    Transwell迁移/侵袭实验 1基本原理 将Transwell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上室内盛装上层培养液,下室内盛装下层培养液,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。 应用不同孔径和经过不同处理…

    基础实验 2020年3月23日 0 559
  • 细胞培养方法(六):MTT检测细胞增殖

    MTT检测细胞增殖情况 1实验原理 MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其吸光度值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数…

    2020年3月23日 0 308
  • 细胞培养方法(五):冻存细胞的复苏

    冻存细胞的复苏 1细胞复苏的原则 在实际操作中,冻存细胞要进行复苏,再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化,以避免慢速融化水分渗入细胞内,再次形成胞内结晶损伤细胞。 2所需材料 · 含有细胞的冻存管 · 37℃水浴锅 ·  37℃预热的生长培养基 3细胞的复苏流程 1.佩戴眼镜和手套,从液氮罐中取出冷冻管。 2.迅速放入37℃水浴中…

    基础实验 2020年3月23日 0 357
  • 细胞培养方法(四):细胞的冻存

    细胞的冻存 目前,细胞冻存最常用的技术是液氮冷冻保存法,主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻,细胞内外的水分会很快形成冰晶,从而引起一系列不良反应。如细胞脱水使局部电解质浓度增高,pH值改变,部分蛋白质由于上述原因而变性,引起细胞内部空间结构紊乱,溶酶体膜由此遭到损伤而释放出溶酶体酶,使细胞内结构成分造成破坏,线粒体…

    基础实验 2020年3月23日 0 325
  • 细胞培养方法(三):贴壁细胞及悬浮细胞的传代方法

    细胞的传代培养 1贴壁细胞的传代 所需材料 · 装有贴壁细胞的培养容器 · 经过组织培养处理的培养瓶、培养板或培养皿 · 完全生长培养基,预热至 37℃ · 一次性无菌15ml试管 · 37℃ 培养箱,充有二氧化碳浓度为 5% 的湿化空气 · 平衡盐溶液,例如:杜尔贝科磷酸盐缓冲液 (DPBS),不含钙、镁和酚红 · 消化酶,例如:胰蛋白酶,不含酚红 贴壁细…

    基础实验 2020年3月23日 0 909