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细胞冻存简介

1、培养室实验准备工作大致同细胞传代培养的前6个步骤。简言之:用紫外消毒等消毒超净工作台面;清洗消毒手部;观察细胞;预热培养用液;点燃酒精灯;取出巴斯德吸管、刻度吸管等插在无菌试管内。

2、冻存液的配置:按如下比例配置:10%甘油+90%培养基,或者10%DMSO+90%培养基。用于配制冻存液的培养基中小牛血清浓度适量提高至20%或更高。所用的甘油需事先高压灭菌,如使用DMSO,则不需要任何灭菌措施。

3、取待冻存的细胞用胰蛋白酶消化(方法见细胞的传代部分)。用含血清的培养基将细胞冲洗下来,将细胞悬液吸到无菌离心管中,800r/min离心5min,弃上清,收集细胞沉淀。如果是悬浮生长的细胞,则可直接离心收集细胞。

4、在沉淀中加入适量冻存液制成细胞悬液,细胞浓度宜大,300万/mL左右,一般一个中方瓶中的细胞浓缩至1mL,冻存液中为宜。

5、细胞悬液装入冻存管中。用封口膜封裹瓶口,做好标记。

6、冻存管在4℃下存放30min,转放-20℃中30min,再转入-70℃过夜,之后即可放入液氮中长久保存,注意进行登记。

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