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细胞培养方法(十):流式细胞术检测细胞周期

流式细胞术检测细胞周期

1实验方法

1.用6孔板培养细胞,待细胞生长达到60%-70%,根据实验需求处理,继续培养;

2.根据实验细胞处理后,把细胞吸出至1.5ml离心管内,200g 离心5min;

3.用 PBS 洗涤细胞2次,200g离心5min,收集1-5×105 细胞;

4.细胞固定:加入1ml冰浴预冷70%乙醇中,轻轻吹打混匀,4℃固定2h或更长时间。固定12-24 h可能效果更佳。200g左右离心3-5min,沉淀细胞。加入约1ml冰浴预冷的PBS,重悬细胞。再次离心沉淀细胞,小心吸除上清,可以残留约50μl左右的PBS,以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。 注意:70%乙醇在使用前需进行预冷处理

5.碘化丙啶染色液的配制:参考下表,根据待检测样品的数量配制适量的碘化丙啶染色液:

细胞培养方法(十):流式细胞术检测细胞周期

6.染色:每管细胞样品中加入0.5 ml碘化丙啶染色液,缓慢并充分重悬细胞沉淀,37℃避光温浴30min。随后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24h内完成流式检测。

7.流式检测:用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光,同时检测光散射情况。

2结果示例及分析

 

细胞培养方法(十):流式细胞术检测细胞周期
 

图片解析:

①G1期(gap1),指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间;

②G2期(gap2),指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间;

③S期(synthesis phase),指DNA复制的时期。

图中第一个峰为G1期,第二个峰为S期,第三个峰为G2期

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