1. sci666首页
  2. 文献解读

文献解读:m6A甲基化的课题怎么设计?

又是一年申基时,m6A RNA甲基化可谓是非编码RNA之后炙手可热的明星,m6A是指腺嘌呤的第6位氮原子发生甲基化修饰,进行“书写”(Writer)、“擦除”(Eraser)或“阅读”(Reader),从而对RNA产生调控作用。

           文献解读:m6A甲基化的课题怎么设计?

m6A修饰可调控miRNA的加工和成熟,但其异常调控在胰腺癌中的作用仍不清楚。胰腺癌作为5年生存率低于5%的恶性肿瘤,吸烟通常被称为加速其发生的诱因。本次解读文献来自Nature子刊Nature Communications(IF:11.878)题目为Excessive miR-25-3p maturation via N6-methyladenosine stimulated by cigarettesmoke promotes pancreatic cancer progression

首先通过基因测序技术对吸烟人的胰管上皮细胞进行测序分析,发现有26个miRNA的表达水平有显著差异(Up-regulated 16例,Down-regulated 10例),特别是CSC(烟草的冷凝物)处理后的细胞中miR-25-3p在所有的miRNA被显著调高,qPCR结果也显示,miR-25-3p可被CSC处理诱导高表达。

           文献解读:m6A甲基化的课题怎么设计?

其次进行体内验证,发现与正常组织样本相比,胰腺组织中miR-25-3p表达显著升高。生存分析结果表明,具有高miR-25-3p含量的病人低存活率显著降低。这些临床结果表明了miR-25-3p与胰腺导管腺癌的发生具有显著相关性。

           文献解读:m6A甲基化的课题怎么设计?

接着文章通过一系列实验发现,胰腺导管腺细胞中超表达METTL3,miR-25-3p的表达就会显著降低,反之miR-25-3p的表达则显著升高,并且通过基因敲除实验等表明m6A的甲基转移酶METTL3参与了CSC对miR-25-3p成熟的调控。

           文献解读:m6A甲基化的课题怎么设计?

作为子刊,技术当然复杂,同样思路更为清晰,紧接着进行机制探索。文章通过测序数据和染色质免疫共沉淀等一系列实验探索CSC是如何促进METTL3表达。结果表明CSC是通过降低了METTL3启动子甲基化,从而促进METTL3的表达。

           文献解读:m6A甲基化的课题怎么设计?

到这仅仅才是一小步,文章进一步验证METTL3通过m6A促进miR-25的前体物质pri-miR-25成熟,并确立m6A修饰位点。接着通过超表达METTL3验证,并通过构建pri-miR-25的m6A突变位点质粒等等实验来说明CSC通过METTL3-m6A调控pri-miR-25的成熟。

           文献解读:m6A甲基化的课题怎么设计?

并通过艰难险阻鉴定出pri-mirR-25成熟过程中m6A的中介物NKAP,即为开篇提到的m6甲基化修饰的三大方式之一——“阅读器”。

           文献解读:m6A甲基化的课题怎么设计?

最后,文章还要和胰腺癌扯上关系。文章发现miR-25-3p是通过抑制抑癌基因PHLPP2的表达,使得其下游AKT通路被激活,从而促进胰腺癌的发生和发展。

           文献解读:m6A甲基化的课题怎么设计?

整体来看,文章发现烟草的冷凝物(cigarette smoke condensate, CSC)通过减低METTL3基因启动子区域的甲基化,从而增强METTL3的表达和m6A水平,并通过m6A-NKAP这条通路促进胰腺导管上皮细胞中具有促癌功能的miR-25-3p的成熟,miR-25-3p成熟同时抑制PHLPP2活性,使得其下游AKT通路被激活,从而促进胰腺癌的发生和发展。

最后,附一张文章的研究流程图供大家参考。

 

           文献解读:m6A甲基化的课题怎么设计?

发表评论

电子邮件地址不会被公开。 必填项已用*标注

联系我们

(857)626-2666

在线咨询:点击这里给我发消息

邮件:123456@whu.edu.cn

QR code