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文献解读:非编码RNA会是下一个研究热点吗?

摘要

肾细胞癌(RCC)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一。尽管最近在RCC的诊断和治疗方面取得了进展,但其预后仍然很差。新出现的证据表明,长非编码RNA(LncRNAs)在癌症生物学中起着至关重要的调节作用。

研究结果

 

文献解读:非编码RNA会是下一个研究热点吗?
图1

 

图1:识别LINC-PINT转录本变体1作为主要LINC-PINT转录本。

 

(A)LINC-PINT变种及其引物示意图。T1-T8:变体名称;P1、P2、P6和P18:引物名称。

 

(B)使用LINC-PINT变种引物产生的cDNA的RT-PCR产物。L,阶梯;I,P18;II,P1;III,P2;IV,P6。

 

文献解读:非编码RNA会是下一个研究热点吗?
图2

 

图2:ccRCC患者LINC-PINT的上调及LINC-PINT水平与ccRCC预后严重程度的相关性。

 

(A)qRT-PCR分析16组ccRCC和非肿瘤组织配对样本中LINC-pint的表达水平。

 

(B)qRT-PCR分析LINC-pint在人肾近端小管上皮细胞系HKC和ccRCC细胞系(786-O,A498,769P,CAKI-2,CAKI-1,ACHN,OS-RC-2和SN12-PM6)中的表达水平。

 

(C)qRT-PCR分析82例ccRCC组织中LINC-PINT的表达水平。

 

(D和E)基于LINC-PINT表达水平的82例ccRCC患者的无病生存(DFS)和总生存(OS)的Kaplan-Meier分析。LINC-PINT的中值水平是截止值。将ccRCC患者分为LINC-PINT高表达组和低表达组。结果说明了来自三个独立实验的数据,并以平均值±SD表示。差异的统计学意义如下:*P<0.05,*P<0.01。

 

文献解读:非编码RNA会是下一个研究热点吗?
图3

 

图3:LINC-PINT促进ccRCC细胞增殖。

 

(A)qRT-PCR分析LINC-PINT在769P和OS-RC-2细胞中过表达后的LINC-PINT表达水平。

 

(B)MTS法检测LINC-pint过表达后769P和OS-RC-2细胞的增殖情况。

 

(C)进行集落形成生长试验,以确定LINC-pint过表达的769P和OS-RC-2细胞的增殖情况。结果说明了来自三个独立实验的数据,并以均值±SD表示。差异的统计学意义如下:*P<0.05,*P<0.01。

 

文献解读:非编码RNA会是下一个研究热点吗?
图4

 

图4:LINC-PINT诱导细胞周期进程并抑制细胞凋亡。

 

(A)荧光激活细胞分选分析显示过表达LINC-pint的769p和OS-RC-2中G1细胞明显减少,S期细胞明显增加。

 

(B)细胞用膜联蛋白V-别藻蓝蛋白(APC)和7-氨基放线菌素D(7-AAD)联合染色,并用流式细胞仪(FACS)进行分析。Annexin V-APC染色阳性的细胞计数为凋亡细胞,并显示凋亡细胞的百分比。结果描绘了来自三个独立实验的数据,并以平均值±SD表示。差异的统计学意义如下:*P<0.05,*P<0.01。

 

文献解读:非编码RNA会是下一个研究热点吗?
图5

 

图5:LINC-PINT与EZH2物理交互。

 

(A)769P和OS-RC-2细胞中LINC-PINT的细胞特性:通过qRT-PCR检测核和细胞质部分中核控制转录本U6、细胞质对照转录本(GAPDH MRNA)和LINC-PINT的表达水平。

 

(B)使用769P和OS-RC-2细胞进行RIP分析,并对共沉淀的RNA进行qRT-PCR以确定LINC-PINT、HOTAIR和MALAT1的表达水平。后两个转录本作为阳性对照。

 

(C)转染EZH2 siRNAs后,用Western blotting分析过表达LINC-pint的769P和OS-RC-2细胞中EZH2的表达。

 

(D)EZH2 siRNAs转染过表达LINC-pint的769P和OS-RC-2细胞,免疫荧光染色分析EZH2的表达。

 

(E)在过度表达LINC-pint的769P和OS-RC-2细胞中,EZH2敲除后用MTS法检测细胞增殖情况。

 

(F)FACS分析显示,在过度表达LINC-pint的769P和OS-RC-2细胞中,当EZH2被击倒时,G1和S期细胞数量分别显著增加和减少。

 

(G)细胞用膜联蛋白V-别藻蓝蛋白(APC)和7-氨基放线菌素D(7-AAD)联合染色,并用流式细胞仪(FACS)进行分析。结果描绘了来自三个独立实验的数据,并以平均值±SD表示。差异的统计学意义如下:*P<0.05,*P<0.01。

 

文献解读:非编码RNA会是下一个研究热点吗?
图6

 

图6:LINC-PINT是p53诱导的lncRNA。

 

(A)通过Western blotting检测P53诱导对不同Dox浓度的响应。

 

(B)用0.2μM Dox处理2 4h后,用免疫荧光染色法检测P53的表达。

 

(C)Dox对769P和OS-RC-2细胞LINC-pint表达的影响。结果描绘了来自三个独立实验的数据,并以平均值±SD表示。差异的统计学意义如下:*P<0.05,*P<0.01。

 

结论

 

总之,我们的结果为LINC-PINT在ccRCC发展中的重要作用提供了新的见解,并表明LINC-PINT可能作为ccRCC的一个有价值的预后生物标志物。

 

DOI:10.2147/OTT.S202938

 

参考文献

 

[1].Hsieh JJ, Purdue MP, Signoretti S, et al. Renal cell carcinoma. Nature Rev Dis Primers. 2017;3:17009. doi:10.1038/nrdp.2017.9

 

[2].Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Cancer statistics, 2018. CA Cancer J Clin. 2018;68(1):7–30. doi:10.3322/caac.21442

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