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外泌体在肿瘤中的常见研究思路(套路)

外泌体现今特指直径在30-150nm左右的盘状小囊泡,外泌体分泌到胞外,经过生物体内体液的循环到达靶标细胞。其实外泌体的研究非常适合医院里做临床的同志,临床医生有着丰富的肿瘤样本,所以对于肿瘤外泌体则更方便提取和获得,那接下来我们就从下面这篇文章为切入,看看外泌体在肿瘤中的研究套路。

 

这篇文章是8月份刚发表在3分杂志上,《exosomes derivedfrom HCC cells with different invasion characteristics mediated EMT through TGF-β/Smad signaling pathway》,思路比较简单清晰。

一、外泌体提取及形态鉴定

首先作者使用超速离心从正常肝细胞(LO2)和两个HCC细胞系的上清液中分离外泌体,之后还通过透射电镜、粒度分析和标记蛋白检测研究了外泌体的形态和特征,两种常用的外泌体标记蛋白CD9和CD63的检测证实了外泌体的提出。

二、外泌体影响细胞表型——源自HCC细胞的外泌体促进细胞迁移

为了研究来源于HCC细胞的外泌体对受体细胞迁移和侵袭的影响,作者采用划痕试验发现来源于HCC细胞的外泌体促进了受体细胞的迁移;此外,transwell结果显示HCC的外泌体中阳性染色细胞的数量显著增加,源于HCC的外泌体可以导致更高的侵袭性。总的来说,这些数据表明HCC细胞来源的外体可以促进肝癌细胞的迁移和侵袭。

三、机制研究——HCC细胞外泌体激活的TGF-β途径

在观察到表型后,作者通过蛋白质印迹检测了上皮间质转化标记蛋白EMT。结果表明,HCC的外泌体抑制上皮标记物E-钙粘蛋白的表达,促进间充质标记物波形蛋白。

TGF-β是肿瘤EMT过程中最重要的细胞因子之一。为了确定外体介导的上皮间质转化的信号通路,作者采用酶联免疫吸附试验检测受体细胞上清液中TGF-β水平的变化并发现HCC外泌体处理后的细胞培养上清液中的TGF-β水平显著升高。此外,我们通过蛋白质印迹检测磷酸化活性形式Smad2和Smad3的表达水平。这些结果表明HCC的外泌体可以通过TGF-β/Smad信号通路诱导肝癌细胞发生上皮转移。

为了阐明TGF-β在外体中的作用,作者是用TGF-β和TGF-β抑制剂处理细胞并提取外泌体。transwell实验显示,经TGF-β组处理的细胞,阳性细胞数明显高于对照组和抑制剂组。western blot验证,相比抑制剂组,TGF-β诱导后的外泌体可以降低上皮钙粘蛋白的表达,增加了波形蛋白的表达。

四、外泌体影响肿瘤的动物实验——来源于HCC细胞的外泌体在体内促进HCC的侵袭和转移

为了更好地理解HCC细胞来源的外泌体在肺转移中的作用,作者建立了裸鼠原位肝移植模型,并用尾静脉注射HCC细胞来源的外泌体进行治疗。小鼠肺组织HE染色结果显示,来源于HCC的外体组的肿瘤血栓阳性数高于注射PBS和来源于LO2的外泌体组,并且呈现高侵袭性和高转移率。

文章思路总结

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