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cHIP实验解析——用抗体沉淀出了DNA

一、ChIP 概念
1.ChIP实验概念
染色质免疫沉淀技术(ChIP)是在全基因组水平研究生命体组织或细胞内蛋白质与DNA相互作用的一种技术方法。
 
2.ChIP 研究对象

染色质免疫沉淀技术(ChIP)可确定特定蛋白(如转录因子)是否结合特定基因组区域(如启动子或其它DNA结合位点)。

二、ChIP实验原理

1.DNA-蛋白质固定

2.DNA片段洗脱分析

三、ChIP实验流程

步骤一:

步骤二:

步骤三:

四、ChIP 结果分析
1.ChIP 结果

染色质免疫沉淀,分离和纯化DNA片段;

PCR扩增,测序分析靶蛋白与DNA结合位点;

qPCR验证与靶蛋白结合的目基因的表达。

2.ChIP 应用

鉴定转录因子和辅因子结合作用。

识别和鉴定DNA甲基化位点。

识别和鉴定DNA甲基化位点。

五、ChIP实验拓展

1.ChIP-高通量测序

2.ChIP-DNA足迹法

3.ChIP 主要特点

精确鉴定蛋白质与DNA结合位点。

蛋白-靶向基因的高通量筛选。

4.ChIP 注意事项

超声过程保持低温,片段电泳检测

 

 验证抗体,摸索目的最佳蛋白浓度。

设置对照,排除实验过程偶然误差。

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