1. sci666首页
  2. 实用技巧
  3. 基础实验

苏木精/伊红染色实验(H&E)原理和Protocol

今天小笔为大家带来的是个小小的实验,虽然小,而且很多时候采用自动染色机能帮你实现,但是,原理及试剂的配置仍然是学习的要点哦,小白们还是要搞搞清楚哒~~~~所以,这主要是一篇戳原理的推文,嘿嘿
 
原  理
H&E (hematoxylin-eosin staining)染色是较为成熟的实验技术,应用广泛,是组织学及病理学检查的基本方法。
 

针对的是石蜡切片的样本(注意哦,有的小伙伴会用冰冻切片的片子去做,这是不好的!因为冰冻切片一般较厚,会使得染色结果不能够判断,太厚了啦!!!)

 
苏木精染料呈碱性,能够把细胞核内染色质与胞浆内的核酸(称为嗜碱性部分)染为蓝紫色;而伊红为酸性的染料,能将嗜酸性部分比如细胞质核细胞外基质中的成分染为红色。
 

细胞核内DNA很容易与苏木精以离子键结合,使得细胞核被染为蓝色。伊红在水中电离后带阴离子,可以与蛋白质结合,使得比如细胞浆、红细胞、结缔组织等染红色

 

通过苏木精染色处理后,再利用伊红染胞浆,从而使得各组分呈现出鲜明的对比色,从而可以明确的看出各种组织的病变。

 
步  骤
1. 试剂配置:
哈瑞(Harris)苏木素液
A液:苏木素1 g         无水酒精10 ml
B液:硫酸铝钾20 g       纯净水200 ml 

配制方法:
称取KAlSO4·12 H2O 36.72 g及苏木素1 g,分别溶解后混合,加热煮沸后,徐徐加入红色氧化汞0.5 g,此时有大量气泡产生(故容器宜大,以防液体溢出),然后将染液迅速冷却,冷却后过滤。每100 ml加入冰醋酸6 ml,并加入甘油(丙三醇)10 ml。混匀后即可使用。
2. 染色步骤:
1)取组织的石蜡切片,二甲苯脱蜡,经乙醇逐步脱水:二甲苯(I)5 min;二甲苯(II)5 min; 100%乙醇2 min;95%的乙醇1 min;80%乙醇1 min;75%乙醇1min;蒸馏水洗2 min(各两次,然后把水吸干)。
2)苏木素染色5 min,自来水冲洗(吸干水)。
3)盐酸乙醇分化30 s(提插数下)。
4)自来水浸泡15 min(吸干水)。
5)置伊红液2-3 min。
6)常规脱水,透明,封片:95%乙醇(I)30 s;95%乙醇(Ⅱ)30 s;100%乙醇(I)30 s;100%乙醇(Ⅱ)1min;二甲苯15 min;中性树脂封片。
 
好哒,播报到此,大实验要学,小实验也要做,大家都棒棒哒。

来源: http://www.sci666.com.cn/17010.html

发表评论

电子邮件地址不会被公开。 必填项已用*标注

联系我们

(857)626-2666

在线咨询:点击这里给我发消息

邮件:123456@whu.edu.cn

QR code