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细胞污染原因整理,鉴别污染原因宝典

对于养细胞的人来说,可谓是谈 「污」色变,任何时候听见细胞污染晴空万里立马暴风雨,而细胞污染又是养细胞过程中,尤其是新手经常遇到的问题。
一般细胞污染大概分为细菌污染、真菌污染、支原体污染还有说法不一的黑胶虫污染等。每种污染的特征都很明显,因为微生物种类实在太多,所以我就选取比较典型和常见的污染讲下。
识别细胞污染的第一步就是从培养箱拿出细胞后观察细胞培养液的颜色,以常用的 DMEM 基础培养液为例,一般使用 DMEM 配制的培养液的颜色为鲜红色,而且是澄清透亮的,注意透亮不代表没有颜色。

但是大多数情况下会看到以下几种颜色,1 号管颜色偏紫一般原因是培养基 ph 升高置 ph 升高因有两个一个是培养液在冰箱放置太久,培养液中的二氧化碳逸出,第二个是培养箱没二氧化碳了,而且整个培养箱的细胞都会出现一样的颜色。

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2 号管颜色有点偏红,一般是细胞生长消耗营养物质导致液 ph 稍微降低。

3 号和 4 号管颜色发黄,导致培养液颜色发黄的原因是培养液中的营养被大量消耗,培养液 ph 降低导致,导致 ph 降低的原因一般是细胞生长太快太满,提醒自己需要给细胞换液或者传代,但是有时细胞密度低生长速度缓慢也会出现这种情况,这时候就要怀疑是不是细胞污染了,除了细胞以外有其他东西在消耗着培养液的营养。

5 号管培养液呈肉眼可见的浑浊,这种情况一般就是细菌污染,具体判断还需要结合镜下的特征。
 
 
第二步就是去导致显微镜下结合镜下特征判断:

 
细菌污染

特征:培液会变黄,而且是浑浊的黄色,镜下观察不到正常细胞形态,镜下遍布细沙样的黑点。细菌污染一定要及时查找原因,如果换液的细胞全部污染,就要怀疑是不是培养液污染,或者使用的器械污染。

如果传代的细胞全部污染,也要怀疑培养液的问题,但是不要忽略了胰酶的问题。如果个别皿污染,有可能是一不小心蹭到或者枪头碰到非无菌区域。

怀疑是胰酶或者是培养液的问题,可以空培养,取空皿只加入怀疑的胰酶或者培养液培养,第二天观察。

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霉菌污染

特征:培液不变浑浊但是会变黄,一般肉眼可见培养液中有团块的霉菌菌落,镜下呈细丝竹节管状,有菌丝结构。霉菌梅雨季节多见,一般霉菌污染及时扔掉,彻底清洁培养箱
 
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白色念珠菌污染

特征:培液颜色没有明显改变,污染严重会变黄,但是是澄清的黄不变浑浊,镜下观察到好多像球形的亮点,多的话会聚集成葡萄串样。白色念珠菌污染不要抢救立马扔了,救也救不好,而且白色念珠菌会互相通过孢子传染。

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杆菌污染

特征:镜下看到许多杆状的细菌,培液颜色没有明显改变。

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支原体污染

特征:支原体污染很隐蔽,主要表现为细胞在生长速度变慢,细胞状态形态改变,而且不断死亡,镜下没啥改变,有时可见许多黑色的细胞碎片。检测支原体污染可以使用支原体检测试剂盒进行检测,现在市面上抗支原体的药很多,效果也都可以。不确定是不是支原体污染可以使用支原体药试一下,如果细胞状态明显改善,有可能就是支原体污染。

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黑胶虫污染

特征:很邪乎,各种说法都有,一般认为是镜下许多黑点在不断布朗运动,刚开始对细胞没啥明显影响,多时会影响细胞的生长。一般也治不好,就扔了吧。现在主流认为黑胶虫是血清的问题,可以从新换一批次血清试一下。

其实污染也没有想象中的那么可怕,在做好消毒灭菌工作的基础上,提高自己的无菌意识和操作技术才是最为重要的。

从进入细胞培养室的穿着到超净台里物品的摆放都大有学问,对于刚养细胞的新手跟着师兄师姐养细胞是个很好的方式,刚开始不要着急上手,看师兄师姐操作时重点看他们的物品摆放、培养皿培养板开盖的方式和放置、吹打细胞的手法等小细节。

养细胞的步骤很简单无非是换液、传代、冻存、复苏。

但是具体有好多小细节需要注意,具体下次再更新,谢谢大家抽空看我在这闲扯一下。

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