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Western Blot实验中为什么8%的分离胶仍然跑不开大分子量的蛋白?

实验做久了,你会遇到很多说不清道不明的事情,我们有时把它归结成运气坏,有时把它归结成不可抗力,今天给大家列举出来几项,我们来一起分析和吐槽一下这些年做不明白的实验。

1、为什么8%的分离胶仍然跑不开大分子量的蛋白?

 

分离胶的浓度一般是根据目的蛋白的分子量进行选择,但有的时候两个目的蛋白分子量相差不远,我们也会选择较大浓度的分离胶,目的是为了能够使较大分子量的蛋白(80-140)区分的更明显。

 

但是如果8%的分离胶和12%的分离胶跑完之后没有任何区别,我们该怎样解释这一情形?不知道各位有没有遇到过这种情况,但这却是我们实验室最近在困扰的问题,唯一的变量就是更换了一批新的丙烯酰胺,所以我们怀疑也许是这批丙烯酰胺的质量出了问题,毕竟它是决定凝胶结构的重要组成部分。

 

但仍然很奇怪,同一个实验室的其他人用相同的试剂配制8%的分离胶,就没有出现上述问题,SO,这个问题又该如何解释?

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